Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui seberapa besar pengaruh kinerja pegawai terhadap kualitas pelayanan di Puskesmas Kota Selatan Kota Gorontalo. Penelitian ini menggunakan analisis data regresi sederhana, jumlah pegawai yang dijadikan sampel sejumlah 38 orang. Hasil penelitian yaitu uji hipotesis antara kinerja pegawai (X) terhadap kualitas pelayanan (Y) di Puskesmas Kota Selatan Kota Gorontalo didapatkan nilai sig untuk pengaruh variabel kinerja pegawai terhadap kualitas pelayanan diperoleh sebesar 0,000 sedangkan nilai 𝛼 adalah 0,05. Jika kedua nilai tersebut dibandingkan maka nilai sig (0,000) masih lebih kecil dibandingkan dengan nilai 𝛼 (0,05). Maka dari itu disimpulkan bahwa kinerja pegawai positif dan signifikan terhadap kualitas pelayanan di Puskesmas Kota Selatan Kota Gorontalo. Besaran pengaruh kinerja pegawai terhadap kualitas pelayanan di Puskesmas Kota Selatan Kota Gorontalo adalah sebesar 81,5%. Sedangkan sisanya 18,5 dipengaruhi oleh faktor atau variabel lain yang tidak diteliti dalam penelitian ini.